​

 ​

خانه / مواد شيميايي / بافرها

تريس

تريس: 108387

tris: 108387

بافر تريس چيست ؟

تريس يك تركيب آلي است كه اغلب در محلول هاي بافر مانند TAE يا TBE براي ژل هاي الكتروفورز استفاده مي شود. بافر تريس در آب بسيار محلول است

و در محدوده pH 7.0-9.0 مفيد است. در تهيه بافر Laemmli ، يكي از رايج ترين بافرهاي SDS-PAGE استفاده مي شود. علاوه بر اين ، Tris همچنين مي تواند براي بسياري از بافرهاي سفارشي در حال اجرا و بارگيري ، اغلب با گليسين و SDS استفاده شود.

هنگام تعيين pH محلول حاوي بافر Tris بايد از استفاده از الكترودهاي pH كه حاوي نقره هستند ، خودداري شود.

ساختار شيميايي تريس چگونه است؟

​

2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol

موارد استفاده از بافر Tris در الكتروفورز پروتئين و وسترن بلات

بافرهاي تريس يكپارچه در الكتروفورز پروتئين و وسترن بلات هستند. بيشتر ژل هاي SDS-PAGE ، بافرهاي در حال اجرا و بافرهاي بلات با Tris بافر مي شوند. همه بافرهاي متداول در دسترس هستند و يا اگر ترجيح مي دهيد بافر Tris خود را بسازيد ، مي توانيد با پودر Tris خالص ، گليسين و ساير معرف هاي بافر درجه زيست شناسي مولكولي شروع كنيد.

اكثر ژل هاي SDS از سيستم بافر ناپيوسته Tris استفاده مي كنند. ژل انباشته ، كه داراي منافذ بزرگي است به طوري كه پپتيدهاي بزرگتر مي توانند به راحتي از طريق آن جا به جا شوند ، معمولاً در pH 6.7-6.8 فرموله مي شود. در اين pH ، يون هاي كلريد يونيزه به سرعت جا به جا مي شوند ، pH را در پشت سر خود بالا مي برند و يك گراديان ولتاژ با يك منطقه با رسانايي كم ايجاد مي كنند ، كه باعث يونيزه شدن گليسين (از بافر در حال اجرا) و كلريد مي شود. اكثر پپتيدهاي موجود در نمونه ، كه به دليل اتصال متصل به SDS داراي بار منفي هستند ، بين كلريد و گليسين جا به جا مي شوند و يك باند باريك تشكيل مي دهند و بنابراين “انباشته” مي شوند.

هنگامي كه انباشته به ژل حلال رسيد ، كه در pH بالاتر است (به طور معمول pH 8.7-8.8) ، افزايش يونيزاسيون گليسين باعث تسريع و پيشي گرفتن پپتيدها مي شود. علاوه بر اين ، اندازه منافذ كوچكتر ژل حل كننده شروع به اثر الك مي كند ، و در نتيجه پپتيدها بر اساس اندازه از هم جدا مي شود .

بيشتر پروتكل هاي وسترن بلات از يك بافر Tris با قدرت يوني پايين براي انتقال پروتئين استفاده مي كنند. زمان انتقال به نوع دستگاه بلات و محدوده اندازه پپتيد مورد نظر بستگي دارد.

استفاده از بافر Tris در الكتروفورز اسيد نوكلئيك آگارز

از بافرهاي Tris به طور گسترده اي براي الكتروفورز DNA آگارز استفاده مي شود. دو بافر اصلي TBE (تريس بورات / EDTA) و TAE (تريس استات / EDTA) هستند. اگرچه تفاوت هايي در وضوح اشكال مختلف DNA و تحرك آنها در حين الكتروفورز وجود دارد ، اما از اين بافرهاي Tris به طور كلي مي توان به جاي يكديگر استفاده كرد. يون هاي بورات موجود در TBE بسياري از آنزيم ها را مهار مي كند ، بنابراين بدون انجام برخي از انواع تصفيه DNA پس از الكتروفورز ، ممكن است برخي از عملكرد هاي downstream با واسطه آنزيم كار نكنند. بنابراين ، بافر TAE براي استفاده روزمره در بيشتر آزمايشگاه هاي DNA مورد استفاده قرار مي گيرد

ساخت بافر تريس

بافر Tris براي اكثر سيستم هاي بيولوژيكي انتخاب خوبي است زيرا pKa آن تقريباً 8.1 در 25 درجه سانتي گراد است و آن را به يك بافر موثر در محدوده pH 7–9 تبديل مي كند. اين محدوده pH براي اكثر فرآيندهاي بيولوژيكي مناسب است.

روش معمول ساخت بيشتر بافرهاي Tris كه معمولاً استفاده مي شود ، شروع فقط با پايه Tris است. مقدار مناسب پودر Tris در آب حل مي شود ، pH با HCl تنظيم مي شود و سپس بافر تا حجم مورد نظر ساخته مي شود. با فرض اينكه در هنگام تنظيم pH ، هيچ جابجايي وجود نداشته باشد ، اين روش قدرت يوني را تغيير نمي دهد. اما ، پس از افزايش بيش از حد و تنظيم مجدد آن با NaOH يا استفاده از Tris HCl و تنظيم pH با NaOH ، تغيير در قدرت يوني ايجاد مي شود. بسته به استفاده مورد نظر از بافر تريس ، چنين تغييري ممكن است مهم باشد يا نباشد.

هنگام ساخت بافر تريس ، استفاده از الكترود سازگار با تريس هنگام تنظيم PH بسيار مهم است. الكترودهاي Ag / AgCl با يك اتصال مي توانند ناپايداري را هنگام استفاده با بافرهاي تريس نشان دهند زيرا نقره به تدريج رسوب مي كند در نتيجه استفاده از الكترودهاي مرجع دو اتصال يا كالومل اندازه گيري دقيق PH را در بافر تريس تضمين مي كند .

​